激光共聚焦掃描顯微鏡以激光作為激發(fā)光源,采用光源針孔與檢測(cè)孔共軛聚焦技術(shù),每次只對(duì)空間上的一個(gè)點(diǎn)(焦點(diǎn))進(jìn)行成像,再通過計(jì)算機(jī)控制的一點(diǎn)一點(diǎn)的掃描形成標(biāo)本的共焦圖像。把X-Y平面(焦平面)掃描與Z軸(光軸)的掃描相結(jié)合,通過累加連續(xù)層次的二維圖像,經(jīng)過專門的計(jì)算機(jī)軟件處理,可以獲得樣本的三維圖像。在此過程中,來自焦點(diǎn)以外的光信號(hào)不會(huì)對(duì)圖像形成干擾,從而大大提高了顯微圖像的清晰度和細(xì)節(jié)分辨能力。
激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細(xì)胞形態(tài),也可以用于細(xì)胞內(nèi)生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計(jì)以及細(xì)胞形態(tài)的測(cè)量, 配合焦點(diǎn)穩(wěn)定系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間活細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀察。
1、細(xì)胞/細(xì)菌/污泥類樣本
①細(xì)胞: 凍存的細(xì)胞;25平方厘米培養(yǎng)瓶長(zhǎng)到70%加滿培養(yǎng)基室溫固定好寄送
②細(xì)菌:菌液5000 rpm離心10 min,于1.5 mL離心管中得到綠豆大小沉淀,寄送沉淀。細(xì)菌類需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
③蛋白/多糖類:樣本加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,樣品不和冰袋接觸。
④污泥類:樣本如果太厚,可以進(jìn)行冷凍切片,具體請(qǐng)和工作人員溝通。
2、植物類樣本
① 直接拍攝:樣品長(zhǎng)寬不超過20mm,高不超過10mm;或直徑不超過10mm,厚度不超過5mm,一定標(biāo)出測(cè)試面。一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
②制樣后拍攝:可進(jìn)行簡(jiǎn)單冰切及刀切,軟化等。樣本準(zhǔn)備好后加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
3、生物膜類樣本
①金屬/瓷磚/巖石等塊體類:建議長(zhǎng)寬高尺寸不超過1 cm,且均要求樣品表面平整,需要標(biāo)出拍攝面(測(cè)試面起伏<200um);
②薄膜類:直徑尺寸不超過2 cm,一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸;
③若在爬片上培養(yǎng)生物膜,可將爬片粘于培養(yǎng)皿底部,充滿培養(yǎng)基,將封口膜密封完全,再4℃保存。
4、提供清楚激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng),拍攝倍數(shù)等要求信息;若需要染色,需要注明染色劑種類,標(biāo)明染料名稱和拍攝條件(激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng))
備注:若做細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)或其他亞細(xì)胞器的定位實(shí)驗(yàn)時(shí),要求樣品自帶熒光。
5、細(xì)胞類樣品直接拍攝,需要封片后常溫避光郵寄。
6、固體類直接拍攝樣品建議長(zhǎng)寬不超過20mm,厚度不超過10mm,重量不超過10g,一定標(biāo)出測(cè)試面。
服務(wù)周期:
一般為樣品接收后的1-2周,具體實(shí)驗(yàn)周期及送樣時(shí)間請(qǐng)與前期對(duì)接工作人員溝通確認(rèn),謝謝!
交付內(nèi)容:
2D模式每樣拍攝3個(gè)視野,交付6張照片,3D模式每樣拍攝1個(gè)視野,交付1張照片。結(jié)果反饋請(qǐng)?jiān)跍y(cè)試完成一周內(nèi),不建議回收樣品,如有需要請(qǐng)?zhí)崆胺答伣o工作人員。
1、激光共聚焦拍照和普通熒光顯微鏡拍照有什么不同?
熒光顯微鏡使用的光源比激光共聚焦通能低,以短波長(zhǎng)的紫外光為主,激光共聚焦光源主要是激光,分辨率高,可以逐點(diǎn)掃描,可以做三維重構(gòu),適合多重染色的樣品觀察。
2、激光共聚焦熒光通道的顏色是實(shí)際顏色嗎?
不是,是偽彩色,光電倍增管只檢測(cè)強(qiáng)度信息,不檢測(cè)顏色信息。顏色可以進(jìn)行更改。不過可通過發(fā)射波長(zhǎng)的范圍,判斷大概是什么顏色。
3、目前平臺(tái)共聚焦有哪些激光器配置?
有405nm,488nm,552nm,555nm,559nm,635nm、650nm
4、蛋白和脂性組份一般用什么染料染?
可以用FITC和尼羅紅染色,區(qū)分蛋白和脂性組份。